Способы идентификации рас патогена:
Определение вирулентности клонов

автор:

Клоны (не менее 10) каждого изолята пересевают на питательную среду, основным компонентом которой служит экстракт из семян люпина. Для этого 100 г размолотых семян люпина заливают 1 л тёплой воды и оставляют на сутки. На другой день экстракт фильтруют через марлю с ватой, фильтрат нагревают на водяной бане до образования осадка. После повторного фильтрования остаётся 660 мл чистого экстракта люпина, который смешивают с раствором следующего состава: в 330 мл дистиллированной воды растворяют 1 г К2РO4, 1,5 г NH4NO3, 0,5 г Са(Н2РO4)2, 0,1 г NaCL, 25 г сахарозы, 1 г лимонной кислоты и 1 мл молочной кислоты. Кроме того, в питательную среду добавляют 2 мл раствора микроэлементов, который готовят заранее, хранят в темном месте и используют по мере надобности. Для этого в 1 л дистиллированной воды растворяют по 100 г Н4(6Мо7O24×4Н2O), ZnSO4, Н3BrO3, MnO4, NaCL; по 50 г MgCoCL2, CuSO4, Ki, Fe2(SO4)3 с добавлением 2 мл HNO3.

Приготовленная питательная среда, доведенная дистиллированной водой до 1 л с pH около 4.5, разливается в 250-мл колбы по 150 мл в каждую, которые закрывают ватными пробками и стерилизуют в автоклаве в течение 30 мин. Преимущество такой среды состоит в том, что за две недели мицелиальная масса Fusarium нарастает в 100—150 раз больше, чем при выращивании на жидкой среде Чапека.

Вирулентность клонов определяют через 15 суток, для чего мицелий и культуральную жидкость каждого клона переносят из колб в сосуды со стерильной почвой в условия теплицы, массу тщательно смешивают, влажность доводят до 70% от ППВ по весу. Затем в каждый сосуд высаживают по 5 семян районированных сортов люпина желтого, белого и узколистного в 6-кратной повторности. Поверхность почвы сосудов засыпают по весу песком во избежание образования корки и до появления всходов укрывают полиэтиленовой плёнкой. В течение вегетации растения поливают, проводят рыхление и учет погибших растений.

Дифференциация клонов по вирулентности наиболее четко проявляется в фазе цветения люпина. Основным показателем вирулентности клонов является гибель растений в сосудах. Клоны, не вызвавшие гибели растений, относят к авирулентным. Степень вирулентности клона устанавливают по проценту сильнопораженных растений: 1—10% — слабовирулентный, 22—25% — средневирулентный и свыше 26% — сильновирулентный. Сильновирулентные клоны используют для создания инфекционных фонов в поле и теплице.